susanty zs: 2016

I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Indonesia merupakan negara agraris yang kaya akan Sumber Daya Alam (SDA) sehingga perlu dijaga dan dilindungi kelestariannya salah satunya dari serangan organisme pengganggu tumbuhan/organisme pengganggu tumbuhan karantina (OPT/OPTK). Serangan OPT/OPTK terhadap komoditas pertanian dapat menurunkan kuantitas maupun kualitas hasil pertanian. OPT/OPTK dapat berasal dari dalam maupun luar negeri dan dari suatu area ke area lainnya, untuk itu perlu pencegahan menyebar luasnya OPT tersebut.

Karantina merupakan suatu upaya pencegahan masuk dan keluarnya hama penyakit atau organisme pengganggu dari luar negeri ke dalam negeri, atau keluarnya dari dalam wilayah Negara Republik Indonesia menurut Undang-Undang Nomor 16 tahun 1992. Organisme pengganggu yang dimaksud adalah organisme yang dapat merusak, mengganggu kehidupan atau menyebabkan kematian tumbuhan. Peranan Karantina sangat dibutuhkan sebagai aspek perlindungan tumbuhan, karena kegiatan tersebut merupakan tindakan yang dianggap paling aman dan ekonomis, bahkan dapat menfilter atau menyaring pemasukan tumbuhan dan bagian-bagiannya. (Tim Badan Karantina Pertanian, 2008).

Organisme Pengganggu Tumbuhan Karantina (OPTK) telah diatur jenis-jenisnya dalam Permentan No. 51 tahun 2015 dimana golongan OPTK tersebut dibedakan atas 2 kategori yaitu OPTK A1 dan A2. OPTK kategori A1 merupakan organisme penggaggu tumbuhan karantina yang belum terdapat dalam wilayah Indonesia (domestik), sedang kategori A2 merupakan OPTK yang telah terdapat dalam wilayah Indonesia namun dijaga keberadaannya agar tidak menyebar luas ke wilayah Indonesia lainnya. OPTK penyebab penyakit yang sangat penting salah satunya adalah jenis virus. Virus dapat menyerang tanaman secara sendiri-sendiri atau sebagai virus komplek. Serangan patogen virus dapat menimbulkan kerugian yang berarti baik secara kuantitas maupun kualitas produksi. Kasus terbaru yang dilaporkan oleh Balai Karantina Pertanian (BKP) yaitu ditemukannya penyakit Papaya ring spot virus (PRSV) pada pepaya yang termasuk OPTK A1 Gol. I pada awal tahun 2013 di Aceh dengan kejadian penyakit 100% di Desa Lambaro Teunom, Kecamatan Lembah Seulawah, Kabupaten Aceh Besar.

OPT/OPTK dapat masuk dan berkembang pada suatu wilayah karena adanya pemasukan atau pengeluaran tumbuhan dan bagian-bagiannya dan/atau benda lain yang dapat membawa OPT/OPTK yang disebut dengan media pembawa OPT/OPTK melalui aktifitas ekspor-impor. Setiap media pembawa OPT/OPTK yang dimasukkan ke dalam wilayah Indonesia atau dikirim dari satu daerah ke daerah lain di dalam wilayah Indonesia dikenakan tindakan karantina yang dilaksanakan oleh BKP. Kegiatan perkarantinaan tumbuhan sebagaimana dimaksud dalam Pasal 10 Undang-Undang Nomor 16 Tahun 1992, dilakukan oleh petugas karantina tumbuhan dengan melaksanakan tindakan karantina, yaitu 8 P yang meliputi ; Pemeriksaan, Pengasingan, Pengamatan, Perlakuan, Penahanan, Penolakan, Pemusnahan dan Pembebasan media pembawa OPTK. Media pembawa OPTK adalah tumbuhan dan bagian-bagiannya dan atau benda lain yang dapat membawa OPTK.

BKP Kelas I Jambi merupakan salah satu UPT yang berperan sebagai perpanjangan tangan Badan Karantina Daerah yang berdasarkan pada peraturan perundangan yang berlaku, berkewajiban untuk menangkal segala kemungkinan masuk dan tersebarnya OPTK dari dan ke dalam wilayah Republik Indonesia khususnya Propinsi Jambi. Kegiatan impor di Jambi didominasi oleh komoditas kacang kedelai dari negara Malaysia dan Singapura (BKP Jambi 2013). OPTK virus yang dapat dibawa oleh benih/biji kedelai (seed/grain) diantaranya Alfalfa mosaic alfamovirus (AMV), Bean pod mottle comovirus (BPMV), Peanut stunt cucumovirus (PSV), Tobacco streak ilarvirus (TSV) (Permentan 2015).

OPTK virus tersebut merupakan kategori A1 Gol I yakni belum terdapat di wilayah Indonesia, namun tidak menutup kemungkinan dapat tersebar ke wilayah Indonesia melalui media pembawa dari kegiatan Ekspo/Impor/Domestik (masuk/luar) sebagai akibat lemahnya pengawasan dari karantina. Oleh karena itu untuk mencegah masuknya OPTK virus terseburt, maka setiap media pembawa yang masuk harus dilakukan pengujian melalui kegiatan “Identifikasi dan Deteksi virus pada Benih/Biji (Seed/Grain).

1.2 Tujuan

Tujuan Umum:

1. Mengamati dan mempelajari kegiatan karantina tumbuhan di Balai Karantina Pertanian Kelas I Jambi.

2. Meningkatkan kemampuan ,wawasan, keterampilan serta menambah ilmu pengetahuan mahasiswa guna melengkapi kompentesi yang telah di dapat selama perkuliahan.

Tujuan khusus:

1. Mempelajari dan mengetahui cara identifikasi dan deteksi virus pada benih/biji (seed/grain)

II. METODE PELAKSAAN MAGANG

2.1 Tempat dan Waktu Pelaksanaan

Kegiatan magang ini dilaksanakan di Balai Karantina Pertanian Kelas I Jambi yang berlangsung selama ± 8 minggu dimulai dari tanggal 02 Oktober sampai 27 Nopember 2015. Kegiatan magang dilaksanakan setiap hari dengan jam kerja pukul 07.30-16.00 wib pada hari senin sampai kamis dan pada hari jum’at pukul 07.30-16.30 wib.

2.2 Ruang Lingkup

Ruang lingkup kegiatan magang ini yaitu segala aspek kegiatan atau pekerjaan yang dilakukan oleh Balai Karantina Pertanian Jambi yang berkaitan dengan organisme pengganggu tanaman karantina (OPTK) serta mempelajari profil Balai Karantina Pertanian Kelas I Jambi. Secara khusus kegiatan magang ini mempelajari cara identifikasi dan deteksi virus pada benih/biji (seed/grain).

2.3 Metode Pelaksanaan Magang

Metode yang dilakukan dalam magang ini yakni dengan metode pengumpulan data primer dan data sekunder. Teknik pengumpulan data yang dilakukan antara lain adalah :

1. Data Primer (Secara Langsung)

a. Observasi

Metode observasi dilakukan dengan melihat atau pengamatan langsung untuk mengetahui cara kerja dan ikut serta dalam kegiatan pengawasan atau karantina yang ada di BKP Kelas I Jambi.

b. Diskusi

Metode ini dilakukan dengan cara melakukan diskusi atau tanya jawab terhadap hal-hal yang berhubungan atau berkaitan dengan kegiatan pengawasan atau karantina.

c. Dokumentasi

d. Metode ini dilakukan dengan cara pengambilan gambar setiap kegiatan-kegiatan yang ada di kantor maupun di lapangan, yang terkait dengan pengawasan dan identifikasi OPTK.

2. Data Sekunder (Secara Tidak Langsung)

Metode ini dilakukan dengan menelaah pustaka dari berbagai sumber dan arsip yang berhubungan dengan kegiatan yang dilaksanakan, misalnya kondisi atau gambaran umum BKP Kelas I Jambi seperti lokasi, wilayah kerja, struktur organisasi, tugas pokok dan fungsi, serta data yang terkait dengan sistem pengawasan atau karantina di Propinsi Jambi.

III. KEADAAN INSTANSI

BALAI KARANTINA PERTANIAN KELAS I JAMBI

3.1 Gambaran Umum Instansi

Balai Karantina Pertanian Kelas I Jambi merupakan instansi yang melayani masyarakat sebagai gerbang utama masuk dan keluarnya produk-produk pertanian dan peternakan. BKP Kelas I Jambi mempunyai visi “Mewujudkan Pelayanan Balai Karantina Pertanian Kelas I Jambi yang Terbaik di Provinsi Jambi”. Misi yang diemban BKP Kelas I Jambi sebagai berikut : (1). Mencegah masuk dan tersebarnya Hama Penyakit Hewan Karantina (HPHK) dan Organisme Pengganggu Tumbuhan Karantina (OPTK) dari luar negeri dan keluar/masuk antar area dalam wilayah Negara Kesatuan Republik Indonesia. (2). Mendukung keberhasilan program peningkatan ketahanan pangan regional/nasional dan pengembangan agribisnis khususnya di Provinsi Jambi. (3). Memfasilitasi kelancaran perdagangan/pemasaran produk agribisnis di Provinsi Jambi dengan menjamin kualitas pertanian ekspor di Pasar Internasional/quality anssurance. (4). Melaksanakan sistem pelayanan perkarantinaan yang prima di Provinsi Jambi. (5). Melaksanakan tertib administrasi dalam pelaksanaan tugas pokok dan fungsi karantina.

BKP Kelas I Jambi mempunyai tugas pokok yaitu melaksanakan kegiatan operasional perkarantinaan hewan dan tumbuhan, serta pengawasan keamanan hayati hewani dan nabati berdasarkan Keputusan Menteri Pertanian Nomor: 22/Permentan/OT.140/4/2008, tanggal 3 april 2008. Fungsi BKP Kelas I Jambi dalam Tata Kerja UPT Karantina Pertanian yaitu: (1). Penyusunan rencana, evaluasi, dan laporan. (2). Pelaksanaan pemeriksaan, pengasingan, pengamatan, perlakuan, penahanan, pemusnahan, dan pembebasan media pembawa Hama Penyakit Hewan Karantina (HPHK) dan Organisme Pengganggu Tumbuhan Karantina (OPTK). (3). Pelaksanaan pemantauan daerah sebar HPHK dan OPTK. (4). Pelaksanaan pembuatan koleksi HPHK dan OPTK. (5). Pelaksanaan pengawasan keamanan hayati hewani dan nabati. (6). Pelaksanaan pemberian pelayanan operasional karantina hewan dan tumbuhan. (7). Pelaksanaan pemberian pelayanan operasional pengawasan keamanan hayati hewani dan tumbuhan. (8). Pengelolaan sistem informasi, dokumentasi dan sarana teknik karantina hewan dan tumbuhan. (9). Pelaksanaan pengawasan dan penindakan pelanggaran peraturan perudang-undangan dibidang karantina tumbuhan dan keamanan hayati hewani dan nabati. (10.) Pelaksanaan urusan tata usaha dan rumah tangga.

3.1.1 Sejarah BKP Kelas I Jambi

Balai Karantina Pertanian Kelas I Jambi berrmula setelah dikeluarkannya Peraturan Menteri Pertanian Nomor: 22/Permentan/OT.140/4/2008 tentang Organisasi dan Tata Kerja Unit Pelaksana Teknis sehingga adanya penyatuan antara 2 Unit Pelayanan Teknis (UPT), yaitu Balai Karantina Tumbuhan Kelas II Jambi dengan Stasiun karantina Hewan Kelas II Jambi. Balai Karantina Pertanian Kelas I Jambi adalah salah satu dari 52 Unit Pelaksana Teknis (UPT) yang tersebar di wilayah Republik Indonesia di bawah lingkup Badan Karantina-Kementerian Pertanian Indonesia. Balai Karantina Pertanian Kelas I Jambi mempunyai tugas serta tanggung jawab operasional Perkarantinaan Hewan dan Tumbuhan serta pengawasan keamanan hayati hewani dan nabati.

3.1.2 Struktur Organisasi BKP Kelas I Jambi

Struktur Organisasi BKP Kelas I Jambi berdasarkan Peraturan Menteri Pertanian No.22/Permentan/QT.140/4/2008 sebagai berikut :

Kepala Balai

Drs. Guntur, SP. MM

KA. SUB BAG. Tata Usaha

Mutia Kartika Sari, SP

Kepala Seksi Karantina Hewan

Dr. Agus Rahmat H

Kepala Seksi Karantina Tumbuhan

NP. Ginting SP, MM

Kepala Seksi Wasdak

Syafriandi, SP

Jabatan Fungsional

3.1.3 Sumber Daya Manusia (SDM)

Sumber daya manusia (SDM) merupakan salah satu faktor penentu keberhasilan dalam mencapai sasaran organisasi. BKP kelas I Jambi memiliki SDM 71 orang Pegawai Negeri Sipil yang terdiri dari latar belakang S2, S1, Diploma dan SLTA. Komposisi berdasarkan jabatan terdiri dari, Pejabat Struktural 5 orang, pejabat fungsional 66 orang (medik veteriner muda: 2 orang, medik veteriner pertama: 3 orang, paramedik veteriner pelaksana lanjutan: 1 orang, paramedik veteriner pelaksana: 5 orang, POPT madya: 1 orang, POPT muda: 1 orang, POPT ahli pertama: 5 orang, POPT terampil: 13 orang, analisis kepegawaian ahli pertama: 5 orang dan fungsional umum: 23 orang). Selain pegawai tetap diatas, ada tenaga harian lepas (THL) sebanyak 11 orang (Satpam/petugas jaga malam : 6 orang dan cleaning service/ kebersihan: 5 orang).

3.1.4 Letak Wilayah Kerja

Balai Karantina Pertanian Kelas I Jambi berlokasi di jalan MTQ Raya No. 1. BKP kelas I Jambi dengan 5 wilayah kerja (wilker) yaitu: (1). Wilker Bandara Sultan Thaha yang berlokasi di Jl. MTQ Raya No. 1 Jambi. (2). Wilker Kuala Tungkal yang berlokasi di Jl. Kesejahteraan/ Komplek Pelabuhan Kuala Tungkal, Tanjung Jabung Barat, Jambi. (3). Wilker Kantor Pos Besar Jambi yang berlokasi di Jl. Sultan Thaha. (4). Wilker Muara Sabak yang berlokasi di Jl. Pelabuhan Muara Sabak Kab. Tanjung Jabung Timur, Jambi. (5). Wilker Talang Duku yang berlokasi di Jl. Raya Pelabuhan/ Komplek Pelabuhan Km.9 Talang Duku Jambi .

Petugas karantina yang bertugas pada masing-masing wilker yaitu 2 orang satu orang dari karantina tumbuhan dan satu orang dari karantina hewan, kecuali pada wilker kantor pos besar jambi hanya satu orang dari karantina tumbuhan. Setiap wilker juga mempunyai kepala wilker yang bertanggungjawab atas wilayah kerjanya berdasarkan tupoksi karantina pertanian sebagai garda terdepan dalam mencegah masuknya OPT/OPTK dari luar negeri ke dalam wilayah Republik Indonesia dan antar wilayah Indonesia.

3.2 Kegiatan Instansi BKP Kelas I Jambi

3.2.1 Tindakan Operasional Karantina Pertanian

Kegiatan Balai Karantina Pertanian Kelas I Jambi mengikuti Peraturan Menteri Pertanian Nomor 22 yaitu dengan melakukan tindakan operasional karantina pertanian. Tindakan operasional karantina pertanian meliputi tindakan terhadap media pembawa yang dimasukkan dari luar negeri ke dalam wilayah Republik Indonesia (impor), dikirim/dibawa ke luar negeri (ekspor) dan dikirim/dibawa dari satu area ke area lain di dalam wilayah Indonesia (domestik). Setiap media pembawa OPTK yang akan dimasukkan ataupun dikirim harus memenuhi persyaratan karantina sesuai dengan dasar hukumnya.

Persyaratan karantina MP OPTK yang dimasukkan ke wilayah RI, wajib:

1) Dilengkapi Sertifikat Kesehatan Tumbuhan dari negara asal atau negara transit bagi tumbuhan dan bagian-bagiannya.

2) Melalui tempat-tempat pemasukan yang telah ditetapkan.

3) Dilaporkan dan diserahkan kepada Petugas Karantina Tumbuhan di tempat pemasukan untuk dilakukan tindakan Karantina lebih lanjut.

(Undang-Undang No. 16 Tahun 1992 pasal 5, Peraturan Pemerintah No. 14 tahun 2002 pasal 2, pasal 5 dan Permentan No. 09 tahun 2009 pasal 4).

Persyaratan karantina MP OPTK yang dibawa atau dikirim dari suatu area yang tidak bebas ke area lain yang bebas di dalam wilayah RI, wajib:

1) Dilengkapi Sertifikat Kesehatan Tumbuhan dari area asal bagi tumbuhan dan bagian-bagiannya, kecuali media pembawa yang tergolong benda lain.

2) Melalui tempat-tempat pemasukan dan pengeluaran yang telah ditetapkan.

3) Dilaporkan dan diserahkan kepada Petugas Karantina Tumbuhan di tempat-tempat pemasukan dan pengeluaran untuk keperluan tindakan karantina.

(Undang-Undang No. 16 Tahun 1992 pasal 5, Peraturan Pemerintah No. 14 tahun 2002 pasal 2, pasal 5 dan Permentan No. 11 tahun 2009 pasal 4)

Persyaratan karantina MP OPTK yang akan dikeluarkan dari wilayah RI, apabila dipersyaratkan oleh negara tujuan, wajib:

1) Dilengkapi Sertifikat Kesehatan Tumbuhan dari tempat pengeluaran bagi tumbuhan dan bagian-bagiannya, kecuali Media pembawa yang tergolong benda lain.

2) Melalui tempat-tempat pengeluaran yang telah ditetapkan.

3) Dilaporkan dan diserahkan kepada Petugas Karantina Tumbuhan di tempat pengeluaran untuk keperluan tindakan Karantina Tumbuhan.

(Undang-Undang No. 16 Tahun 1992 pasal 6 dan Peraturan Pemerintah No. 14 tahun 2002 pasal 4, pasal 5)

Tindakan 8P karantina pertanian berdasarkan peraturan pemerintah no 14 tahun 2002 pasal 10 diantaranya :

a. Pemeriksaan

· Pemeriksaan administratif untuk mengetahui kelengkapan, kebenaran isi, dan keabsahan dokumen persyaratan. Dokumen Impor yang dimaksud adalah : harus adanya Phytosanitary Certificate dari Negara asal yang dikeluarkan oleh NPPO Negara asal serta kewajiban tambahan lainnya.

· Pemeriksaan fisik dari media pembawa.

· Pemeriksaan laboratorium

b. Pengasingan dan Pengamatan

TindakanPengasingan dan Pengamatan dilakukan karena memerlukan waktu tertentu untuk mendeteksi kemungkinan adanya OPTK yang karena sifatnya memerlukan waktu lama, sarana dan kondisi khusus dengan cara menempatkan di suatu lokasi yang terisolasi sehingga apabila terdapat OPTK tidak menyebar ke lingkungan sekitar. Kondisi khusus antara lain suhu, iklim, dan ketinggian tempat. Waktu tertentu sesuai dengan masa inkubasi OPT dan/atau OPTK yang bersangkutan.

c. Perlakuan

Tindakan Perlakuan dilakukan jika Media pembawa tidak bebas dari OPTK Gol. II. Tindakan Perlakuan ini dilakukan dengan tujuan untuk membebaskan media pembawa dari OPTK Gol. II; atau dipersyaratkan sebagai kewajiban tambahan. Tindakan Perlakuan dapat dilakukan dengan cara fisik dan/atau kimiawi, sedangkan perlakuan sebagai kewajiban tambahan dapat dilakukan di negara asal, di atas alat angkut selama perjalanan, di negara transit, dan/atau setelah tiba di wilayah RI.

d. Penahanan

Tindakan Penahanan dilakukan jika suatu Media Pembawa dari negara asal tidak dilengkapi dengan dokumen persyaratan. Tindakan ini dilakukan untuk mengamankan media pembawa dengan cara penyegelan dan menempatkan di bawah penguasaan dan pengawasan Petugas Karantina Tumbuhan.

e. Penolakan

Tindakan Penolakan dilakukan apabila dalam jangka waktu 14 hari kerja pemilik tidak dapat melengkapi dokumen yang dipersyaratkan. Tindakan Penolakan dilakukan terhadap media pembawa yang tidak dapat dibebaskan dari OPTK Gol. II dan masih terdapat di atas alat angkut.

f. Pemusnahan

Tindakan Pemusnahan dilakukan apabila Media Pembawa tidak bebas dari OPTK Gol. I, busuk atau rusak, tidak dapat dibebaskan dari OPTK Gol. II dan MP telah diturunkan dari alat angkut. Atau apabila dalam jangka waktu 14 hari kerja setelah menerima surat penolakan, pemilik tidak mengeluarkan media pembawa dari wilayah RI dilakukan Pemusnahan.

g. Pembebasan

Tindakan Pembebasan dilakukan apabila semua persyaratan telah dilengkapi dan dilakukan terhadap media pembawa yg bebas dan/atau dapat dibebaskan dari OPTK Kategori A1, OPTK Kategori A2 dan/atau OPTP dengan melepaskan dan/atau membolehkan media pembawa masuk ke dalam wilayah RI. Serta diterbitkan Sertifikat Pelepasan.

3.2.2 Pemeriksaan Fisik di Lapangan

Pemeriksaan ini dilakukan untuk melihat kesehatan dari media pembawa secara visual melalui bentuk fisiknya. Kesehatan yang dimaksud adalah melihat adanya kemungkinan OPT dan/OPTK dalam media pembawa dengan cara pengambilan sampel yang diduga bergejala atau terdapat serangga di dalamnya. Pengambilan sampel yang telah dilakukan yaitu pada cangkang kelapa sawit dan pinang yang akan di ekspor. Pemeriksaan ini bertujuan untuk kelengkapan dokumen dari media pembawa yang akan di ekspor.

A. Pemeriksaan cangkang kelapa sawit

Cangkang kelapa sawit ini akan di ekspor ke Negara Malaysia melalui pelabuhan air menggunakan kapal.

Gambar 1. Lokasi pemeriksaan sampel cangkang kelapa sawit di Kemingking

Gambar 2. Pengambilan sampel

Gambar 3. Sampel cangkang kelapa sawit

B. Pemeriksaan Pinang

Pinang ini akan di ekspor ke Negara Pakistan maka dilakukan pemeriksaan berdasarkan permintaan pemilik barang/perusahaan untuk memenuhi persyaratan/dokumen sehingga barang (pinang) dapat dikirim dan diterima oleh negara yang bersangkutan.

Gambar 4. Lokasi pemeriksaan pinang di PT. Agrowijaya

Gambar 5. Pengambilan sampel pinang

3.2.3 Laboratorium

Laboratorium karantina tumbuhan di BKP kelas I Jambi terdiri atas laboratorium mikologi, laboratorium entomologi, laboratorium biomolekuler dan ELISA serta laboratorium nematoda/gulma. Setiap laboratorium memiliki beberapa personel dan satu orang ditunjuk sebagai penanggung jawab. Masing-masing laboratorium memiliki peralatan laboratorium sendiri sesuai dengan bidangnya. Namun demikian ada beberapa peralatan yang dapat dipakai secara bergantian oleh semua laboratorium dengan tanggung jawab keamanan dan pemeliharaan yang dibebankan kepada salah satu laboratorium.

3.2.3.1 Mikologi

Gambar 6. Ruang Mikologi

Laboratorium Mikologi menangani pemeriksaan sampel secara langsung. Metode yang sering digunakan adalah metode Blotter Test (kertas saring) dan Washing Test. Metode Blotter Test digunakan untuk menumbuhkan patogen pada sampel dalam waktu inkubasi selama 5-7 hari. Pengamatan dilakukan secara makroskopis dan mikroskopis terhadap karakteristik patogen dengan melihat bentuk dan warna koloni cendawan yang tumbuh dari sampel tersebut. Metode Washing Test digunakan untuk menumbuhkan cendawan yang sulit tumbuh pada media khususnya cendawan yang bersifat obligat dan cendawan yang tumbuh di permukaan. Peralatan yang tersedia di dalam laboratorium ini, antara lain : Mikroskop Stereo, Mikroskop Kompon, Termometer, Kompor Listrik, Kotak Inkubasi, Inkubator, Biosafety Cabinet, Lemari Pendingin, Lemari penyimpanan (mis. objek glass, cover glass, dan koleksi preparat cendawan).

Prosedur kerja metode Blotter test :

1. Biji/bagian tanaman yang di duga bergejala di sterilisasi permukaan dengan larutan klorox 5% selama 3-5 menit dan dibilas sebanyak 3 kali dengan aquades.

2. Menyemai biji/bagian tanaman yang diduga bergejala di dalam laminar air flow yakni meletakkan biji/bagian tanaman tersebut ke dalam petridish yang sebelumnya diberi kertas saring yang dibasahi aquades.

3. Biji/bagian tanaman yang telah disemai di letakkan dalam ruang inkubasi selama 3-7 hari.

4. Dilakukan pengamatan secara makroskopis dan mikroskopis.

Prosedur kerja Washing test :

1. Biji yang diduga bergejala ditimbang sebanyak 50 gram, dimasukkan ke dalam erlenmeyer dan diisi 100 ml aquades serta diberi 1 tetes tween.

2. Shaker/kocok erlenmeyer tersebut 2-10 menit, saring air kocokan dengan menggunakan kain kasa ke dalam gelas piala.

3. Air kocokan/larutan di masukkan ke dalam tabung sentrifuse dan di sentrifuse dengan kecepatan 1500-2000 rpm selam 5 menit.

4. Endapan yang dihasilkan selama disentrifuse di ambil dengan cara membuang cairan dan menyisahkan endapan yang kemudian dimasukkan ke dalam tabung 5 ml.

5. Endapan di amati dibawah mikroskop kompon untuk melihat mikroskopisnya, endapan dapat diberi lactovenol sebanyak 1 tetes atau tidak sama sekali.

3.2.3.2 Biomolekuler dan ELISA

Ruang biomolekuler digunakan sebagai ruangan untuk pengujian virus dan bakteri yang menggunakan metode uji serologi. Metode serologi merupakan salah satu cara mendeteksi dan mendiagnosa virus penyakit pada tanaman yang telah diaplikasikan secara meluas. Metode DAS-ELISA (Double Antibody Sandwich-Enzyme Linked Immunosorbent Assay) merupakan teknik untuk mendeteksi beberapa jenis antibodi dari satu sampel serum dan cepat untuk menguji sampel bakteri dan virus dalam jumlah besar. ELISA juga memiliki tingkat spesifikasi yang tinggi. Adapun peralatan yang tersedia seperti : Vortex, Shaker, Laminar Air Flow, Rak Penyimpanan, Freezer, Komputer, Water Bath.

Gambar 7. Ruang Biomulekuler dan ELISA

3.2.3.3 Nematologi/Gulma

Gambar 8. Ruang Nematologi/Gulma

Laboratorium Nematoda/Gulma digunakan untuk pemeriksaan terhadap sampel berupa tanah, bagian tumbuhan (akar, batang dan umbi), biji/benih tumbuhan maupun biji tumbuhan bahan konsumsi. Peralatan yang tersedia di ruang Nematoda/Gulma adalah corong Bearman, timbangan analitik, Biosafety Cabinet.

3.2.3.4 Entomologi

Gambar 9. Ruang Entomologi

Laboratorium Entomologi digunakan untuk mengidentifikasi serangga dan menyimpan koleksi serangga. Peralatan yang tersedia di ruang entomologi ialah komputer, mikroskop stereo, koleksi serangga, peralatan pengawetan serangga.

Identifikasi serangga dilakukan berdasarkan panduan buku kunci determinasi serangga sehingga mempermudah dalam mengidentifikasi suatu serangga yang belum diketahui spesiesnya. Serangga yang diidentifikasi yakni dari ordo diptera (lalat buah) dan ordo coleoptera (kumbang biji kedelai).

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1.Hasil

Balai Karantina Pertanian Kelas I Jambi tahun 2013 mencatat bahwa kegiatan impor di Jambi didominasi oleh komoditas kacang kedelai dari Negara Malaysia dan Singapura. Biji kacang kedelai yang masuk ke Jambi diambil sebanyak 1 kg sebagai sampel untuk diperiksa di laboratorium karantina pertanian. Sampel diperiksa dengan cara memilih biji yang bergejala untuk dilakukan pengujian.

Gambar 10 . Pemilihan sampel bergejala

Gambar 11. Sampel bergejala

Pengujian dilakukan terhadap virus Bean Pod Mottle Virus (BPMV), Tobacco Streak Virus (TSV), Alfalfa Mosaic Virus (AMV), Peanut Stunt Virus (PSV) dan bakteri Erwinia carotovora subsp. Atroseptica (ECA) menggunakan metode DAS-ELISA (Double Antobody Sandwich-Enzym Linked Immunosorbent Assay). Cara kerja dari metode ini yakni sebagai berikut :

1. Menentukan lay out (Lampiran 4, 5, 6) dan jumlah sumuran pada mikroplate yang akan digunakan untuk pengujian (minimal 2 ulangan untuk setiap sampel, buffer, kontrol positif dan kontrol negatif)

2. Melarutkan capture antibodi virus dengan Carbonat Coating Buffer sesuai jumlah sumuran dengan petunjuk pada kemasan botiol, lalu masukan masing-masing 100 µl ke dalam sumuran mikroplate yang akan digunakan untuk uji

3. Meletakkan mikroplate yang telah diisi tersebut ke dalam kotak lembab (kotak plastik yang dialasi dengan tissue basah), lalu inkubasi selama 4 jam pada suhu ruang

4. Menyiapkan ekstrak sampel dengan cara menggerusnya dalam General Extraction Buffer (GEB) 1:10 (berat/volume)

5. Membuang larutan pada sumuran, kemudian cuci sumuran mikroplate sebanyak 2 kalidengan larutan PBST menggunakan ELISA Washer. Keringkan mikroplate dengan cara dibalik dan ditepuk-tepuk pada permukaan yang telas dialasi tissue

6. Mengisi sumuran mikroplate masing-masing sebanyak 100 µl sap sampel, kontrol positif, kontrol negatif, dan GEB buffer yang telah disiapkan

7. Meletakkan mikroplate ke dalam kotak lembab, lalu inkubasi selama 1 malam pada suhu 4⁰ c

8. Mencuci mikroplate sebanyak 7 kali dengan larutan PBST menggunakan ELISA Washer. Keringkan mikroplate dengan cara dibalik dan ditepuk-tepuk pada permukaan yang telas dialasi tissue

9. Melarutkan enzim konjugate dalam ECI Buffer sesuai jumlah sumuran dengan petunjuk pada kemasan botol, lalu masukan masing-masing 100 µl ke dalam sumuran mikroplate. Isi sumuran mikroplate masing-masing dengan 100 µl enzim konjugat yang telah dilarutkan

10. Meletakkan mikroplate ke dalam kotak lembab, lalu inkubasi selama 2 jam pada suhu ruang

11. Mencuci mikroplate sebanyak 8 kali dengan larutan PBST menggunakan ELISA Washer. Keringkan mikroplate dengan cara dibalik dan ditepuk-tepuk pada permukaan yang telas dialasi tissue

12. Menyiapkan larutan PNP dengan mencampur aquadestilata, PNP Buffer dan PNP tablet (catatan: jangan sentuh PNP tablet dengan tangan atau terpapar cahaya yang kuat).

13. Mengisi sumuran mikroplate masing-masing 100 µl larutan PNP. Masukan mikroplate tersebut ke dalam kotak lembab, lalu inkubasi selama 15-60 menit pada suhu ruang gelap

14. Pengamatan hasil dapat dilakukan dengan pembacaan menggunakan ELISA Reader pada panjang gelombang 505 nm. Hasil diindikasi positif apabila nilai absorbansi sampel sama atau lebih dari 2 kali rata-rata nilai absorbansi kontrol negatif

15. Pengamatan juga dapat dilakukan secara visual terhadap perubahan warna yang terjadi pada larutan sampel. Bila terjadi perubahan warna menjadi kuning, ada indikasi bahwa sampel yang di uji positif

Berdasarkan pengujian yang telah dilakukan terhadap sampel biji kedelai yang diduga bergejala diperoleh hasil pembacaan ELISA Reader sebagai berikut :

Tabel 1. Pembacaan mesin Elisa kode sampel 1000023

Kode Sampel	Nilai Absorbansi Elisa Reader		Nilai Rata-rata	Perubahan Warna (*)	Kesimpulan Hasil	Keterangan
Kode Sampel	U1	U2	Nilai Rata-rata	Perubahan Warna (*)	Kesimpulan Hasil	Keterangan
BPMV	0.312	0.304	0.308	-	Negatif BPMV
AMV	0.258	0.239	0.2485	-	Nefatif AMV
PSV	0.230	0.234	0.232	-	Negatif PSV
TSV	0.233	0.234	0.2335	-	Negatif TSV
ECA	0.235	0.231	0.233	-	Negatif ECA
Buffer	0.260	0.244	0.253	-
K^-BPMV	0.279	0.243	0.261	-
K⁺BPMV	0.247	0.282	0.279	+
K^-AMV	0.253	0.305	0.238	-
K⁺AMV	0.272	0.282	0.2375	+
K^-PSV	0.239	0.237	0.2455	-
K⁺PSV	0.248	0.266	0.2645	+
K^-TSV	0.235	0.240	0.279	-
K⁺TSV	0.257	0.256	0.257	+
K^-ECA	0.254	0.237	0.2565	-
K⁺ECA	0.050	0.286	0.168	+

*) - : tidak terjadi perubahan warna

+ : terjadi perubahan warna (kuning)

Keterangan :

· Nilai absorbansi diukur menggunakan ELISA Reader Thermo Scientific Multiskan FC pada panjang gelombang λ405 nm (A₄₀₅)

· Nilai absorbansi pada setiap sampel adalah rata-rata dari 2 ulangan

· Hasil dikatakan positif bila rata-rata absorbansi sampel lebih besar atau sama dengan 2 x rata-rata absorbansi kontrol negatif

Tabel 2. Nilai Absorbansi Sampel dan Absorbansi Kontrol Negatif

Nilai Absorbansi setiap Sampel	2 X Rata-rata Absorbansi Kontrol Negatif
0.308	0.522
0.2485	0.476
0.232	0.491
0.2335	0.558
0.233	0.513

Tabel 3. Pembacaan pada mesin Elisa kode sampel 1000024

Kode Sampel	Nilai Absorbansi Elisa Reader		Nilai Rata-rata	Perubahan Warna (*)	Kesimpulan Hasil	Keterangan
Kode Sampel	U1	U2	Nilai Rata-rata	Perubahan Warna (*)	Kesimpulan Hasil	Keterangan
AMV	0.280	0.250	0.265	-	Negatif AMV
ECA	0.312	0.301	0.3065	-	Negatif ECA
BPMV	0.456	0.257	0.3565	-	Negatif BPMV
TSV	0.228	0.221	0.2195	-	Negatif TSV
PSV	0.246	0.262	0.254	-	Negatif PSV
Buffer	0.245	0.265	0.255	-
K^-AMV	0.256	0.362	0.309	-
K⁺AMV	0.421	0.319	0.370	+
K^-ECA	0.208	0.204	0.206	-
K⁺ECA	0.252	0.239	0.2455	+
K^-BPMV	0.205	0.342	0.2735	-
K⁺BPMV	0.251	0.294	0.2725	+
K^-TSV	0.479	0.389	0.434	-
K⁺TSV	1.418	0.745	1.0815	+
K^-PSV	0.267	0.235	0.251	-
K⁺PSV	0.255	0.378	0.3165	+

*) - : tidak terjadi perubahan warna

+ : terjadi perubahan warna (kuning)

Keterangan :

· Nilai absorbansi diukur menggunakan ELISA Reader Thermo Scientific Multiskan FC pada panjang gelombang λ405 nm (A₄₀₅)

· Nilai absorbansi pada setiap sampel adalah rata-rata dari 2 ulangan

· Hasil dikatakan positif bila rata-rata absorbansi sampel lebih besar atau sama dengan 2 x rata-rata absorbansi kontrol negatif

Tabel 4. Nilai Absorbansi Sampel dan Absorbansi Kontrol Negatif

Nilai Absorbansi setiap Sampel	2 X Rata-rata Absorbansi Kontrol Negatif
0.265	0.618
0.3065	0.412
0.3565	0.547
0.2195	0.868
0.254	0.502

Tabel 5. Pembacaan pada mesin Elisa kode sampel 1000025

Kode Sampel	Nilai Absorbansi Elisa Reader		Nilai Rata-rata	Perubahan Warna (*)	Kesimpulan Hasil	Keterangan
Kode Sampel	U1	U2	Nilai Rata-rata	Perubahan Warna (*)	Kesimpulan Hasil	Keterangan
AMV	0.274	0.232	0.253	-	Negatif AMV
ECA	0.254	0.256	0.255	-	Negatif ECA
BPMV	0.461	0.285	0.373	-	Negatif BPMV
TSV	0.252	0.261	0.2565	-	Negatif TSV
PSV	0.248	0.251	0.2495	-	Negatif PSV
Buffer	0.234	0.496	0.365	-
K^-AMV	1.281	0.240	0.7605	-
K⁺AMV	1.027	0.806	0.9165	+
K^-ECA	0.284	0.312	0.298	-
K⁺ECA	0.262	0.333	0.2975	+
K^-BPMV	1.976	1.962	1.969	-
K⁺BPMV	0.286	0.261	0.2735	+
K^-TSV	0.255	0.267	0.261	-
K⁺TSV	0.936	0.898	0.917	+
K^-PSV	0.251	0.253	0.252	-
K⁺PSV	0.249	0.255	0.252	+

*) - : tidak terjadi perubahan warna

+ : terjadi perubahan warna (kuning)

Keterangan :

· Nilai absorbansi diukur menggunakan ELISA Reader Thermo Scientific Multiskan FC pada panjang gelombang λ405 nm (A₄₀₅)

· Nilai absorbansi pada setiap sampel adalah rata-rata dari 2 ulangan

· Hasil dikatakan positif bila rata-rata absorbansi sampel lebih besar atau sama dengan 2 x rata-rata absorbansi kontrol negatif

Tabel 6. Nilai Absorbansi Sampel dan Absorbansi Kontrol Negatif

Nilai Absorbansi setiap Sampel	2 X Rata-rata Absorbansi Kontrol Negatif
0.253	0.6305
0.255	0.931
0.373	0.5345
0.2565	0.522
0.2495	0.504

Pengamatan visual dilakukan setelah 60 menit inkubasi pada suhu ruang gelap yakni denngan melihat perubahan warna mikroplate. Pada pengamatan yang dilakukan diperoleh hasil bahwa sampel biji kedelai negatif OPTK karena tidak terjadi perubahan warna menjadi kuning pada kontrol negatif (Gambar 12)

Gambar 12. Pengamatan visual pada mikroplate

2.4 Pembahasan

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) merupakan teknik serologi canggih yang menjanjikan untuk deteksi dan identifikasi patogen tumbuhan (Seal dan Elpninstone 1994, Converse dan Martin 1990). Teknik ini dapat diterima secara luas oleh penggunanya, karena: (1) efisien menggunakan bahan kimia, 1,0 ml antiserum dapat digunakan untuk menguji 10-20 ribu sampel; (2) bahan kimia yang digunakan tidak berbahaya dan memiliki daya simpan lama; (3) bahan yang diuji dapat langsung berupa ekstrak tanaman sakit tanpa harus mengisolasi patogennya terlebih dahulu; (4) mempunyai kepekaan deteksi tinggi (1-10 ng virus/ml dan 103 -104 sel bakteri/ml); (5) prosedurnya relatif sederhana dan cepat, antara 5- 24 jam; (6) hasilnya dapat kuantifikasi; (7) dapat digunakan untuk menguji sampel dalam jumlah besar sekaligus; dan (8) dapat digunakan langsung di lapang (Thomas et al. 1989, Converse dan Martin 1990).

Prinsip dasar ELISA adalah reaksi antara antigen (Ag) dengan antibodi (Ab) menjadi molekul Ag-Ab yang lebih besar dan mudah mengendap. Perbedaannya, penggamatan hasil reaksi pada serologi biasa berdasarkan endapan molekul Ag-Ab, sedangkan pada ELISA berdasarkan perubahan warna yang terjadi pada substrat pereaksi sesuai dengan label atau imunoprob (immuno probe) konjugat Ab-enzim. Perubahan warna terjadi akibat hidrolisa enzimatik pada reaksi antara konjugat Abenzim dengan substratnya, sehingga hasil ELISA lebih peka dan dapat dikuantifikasi (Converse dan Martin 1990). Komponen utama perangkat ELISA terdiri atas Ab, Ag, imunoprob, substrat, reagen penghenti reaksi (blocking reagent), bufer, dan cawan ELISA. Perangkat ELISA dapat dirakit sendiri oleh peneliti atau diperoleh secara komersial dari berbagai perusahaan di luar negeri, seperti Agdia Inc. (Folkhart, Indiana), dan Neogen Inc. (Scotland).

Teknik ELISA yang mula-mula diadopsi untuk deteksi patogen tumbuhan adalah Double Antibody Sandwich ELISA (DAS-ELISA). Teknik ini disebut DAS-ELISA, karena dalam reaksi, AgP diapit (sandwiched) oleh dua lapis Ab, yaitu AbP dan Ab pada konjugat (imunoprob). Tahapan reaksi diawali dengan melekatkan AbP ke lubang cawan ELISA, diikuti berturut-turut dengan menambahkan AgP, konjugat AbP-enzim, dan substrat, dan diakhiri dengan penambahan blocking reagent (Converse dan Martin 1990). Aplikasi teknik dan perangkat ELISA di Indonesia umumnya masih terbatas pada taraf penelitian. Penggunaan praktis perangkat ELISA telah dilakukan oleh petugas Badan Karantina Pertanian, terutama untuk intesepsi OPTK.

Di Indonesia, DAS-ELISA telah digunakan untuk deteksi dan identifikasi beberapa virus dan bakteri patogen. Jumanto et al. (2001) menggunakan DASELISA Langsung untuk deteksi Rice Tungro Virus pada padi dan serangga vektornya, bahkan untuk seleksi ketahanan varietas padi terhadap penyakit tungro. Suryadi et al. (2007) menggunakan DAS-ELISA Tidak Langsung dengan PAb-RS9819 untuk deteksi bakteri Ralstonia Solani dari biji dan tanaman kacang tanah dengan kepekaan deteksi 104 sel/ml, serupa yang dilaporkan Smith (1994) dan setara dengan deteksi menggunakan PAb yang dilakukan di CIP, Peru (Priou 2001).

Pengujian DAS-ELISA yang dilakukan di laboratorium virologi Balai Karantina Pertanian Kelas 1 Jambi digunakan untuk mendeteksi virus dan bakteri yakni Alfalfa mosaic virus (AMV), Tobacco streak virus (TSV), Peanut stunt virus (PSV), Bean pod mottle virus (BPMV) dan bakteri Erwinia carotovora subsp. Atroseptica (ECA). Virus dan bakteri yang di uji merupakan OPTK A1 yang terdapat dalam Permentan no 51 tahun 2015 yang belum terdapat di Indonesia, namun ada di luar negeri. Aktifitas impor/ekspor/domestik (masuk/keluar) dapat menjadi faktor masuknya OPTK ke wilayah Republik Indonesia. OPTK yang di uji merupakan OPTK yang terdapat pada media pembawa benih/biji dengan tanaman inang kedelai (Glycine max Merril). BKP K I Jambi mencatat kegiatan impor di provinsi Jambi didominasi oleh komoditas kacang kedelai dari negara Malaysia dan Singapura yang merupakan negara transit (BKP Jambi 2013). Kegiatan pengujian virus dan bakteri ini merupakan rangkaian tindakan karantina yakni pemeriksaan laboratorium. Biji kedelai yang diuji merupkan hasil pemeriksaan sebelumnya dan diduga bergejala.

Hasil pengujian ini diperoleh melalui beberapa tahapan (Lampiran 1) berdasarkan protokol aqdia. Untuk menyatakan bahwa hasil yang diperoleh benar maka dapat dilihat dari pekerjaan kita selama melakukan pengujian. Indikator kerja raksi hasil dikatakan benar adalah kontrol negatif harus tidak berwarna, kontrol positif harus berwarna dan buffer harus tidak berwarna. Selama proses pengujian ketiga hal tersebut dapat dipenuhi dan hasil pengujian seperti yang terlihat pada tabel di atas semuanya negatif. Untuk menyatakan hasil pengujian positif dapat dilihat dari pembacaan mesin Elisa apabila nilai absorbansi sampel lebih atau sama dengan 2 kali rata-rata absorbansi kontrol negatif. Selain itu dapat dilihat dari perubahan warna kontrol negatif pada mikroplate menjadi warna kuning (gambar 13). Dari hasil pembacaan di peroleh nilai absorbansi sampel tidak lebih besar ataupun sama dengan 2 kali rata-rata kontrol negatif begitu pula tidak terjadi perubahan warna pada kontrol negatif dalam mikroplate sehingga hasil dinyatakan negatif.

Hasil pembacaan mesin Elisa sampel 1000025 menunjukkan kontrol negatif BPMV sangat besar dibanding kontrol positifnya yakni 1,969 dan 0,2375 (Tabel 5), dimana seharusnya nilai kontrol positif lebih besar dibandingkan kontrol negatif. Hal ini mungkin dikarenakan kontrol antisera yang digunakan sudah tidak bagus lagi/rusak karena sudah lama dan disimpan dalam tempat yang tidak semestinya yakni dalam suhu 4⁰ c dimana seharusnya pada suhu 20⁰ c atau ada kesalahan dalam pekerjaan, namun jika terjadi kesalahan pengisian kontrol maka pada sumuran kontrol negatif terjadi perubahan warna menjadi kuning (gambar 13). Meskipun diperoleh hasil pembacaan yang demikian target tetap dikatakan negatif karena nilai absorbansi sampel tidak lebih besar atau sama dengan 2 klai rata-rata kontrol negatif (Tabel 6).

Hasil negatif ini dikarenakan target yang diuji merupakan OPTK A1 yang belum ada di Indonesia. Tetap dilakukannya pengujian terhadap terget karena target yang di uji dapat dibawa benih/biji dari tanaman inang kedelai. Ditambah tingginya pengimporan biji kedelai dari negara transit Malaysia ke Jambi sehingga perlu untuk di deteksi.

V. PENUTUP

5.1.Kesimpulan

Pengujian BPMV, TSV, AMV, PSV dan ECA dilakukan dengan meode DAS-ELISA (Double Antibody Sandwich-Enzym Linked Immunosorbent Assay). Langkah kerja metode DAS-ELISA yaitu :

1. Menentukan lay out dan jumlah sumuran pada mikroplate yang akan digunakan untuk pengujian (minimal 2 ulangan untuk setiap sampel, buffer, kontrol positif dan kontrol negatif)